Los analizadores de hematología automatizados proporcionan una forma rápida y precisa de realizar hemogramas completos, y ahorran el tiempo y el riesgo de error de realizar estos recuentos manualmente o externamente. Sin embargo, los analizadores de hematología clínica modernos también pueden hacer mucho más, proporcionando menús ampliados de parámetros y aprovechando técnicas avanzadas como la citometría de flujo para aumentar el alcance de lo que se puede aprender de un análisis de sangre.
Con muchas opciones diferentes para instrumentos de prueba de hematología en el mercado, es importante conocer las diferencias entre las diferentes tecnologías de medición, especificaciones y características que estos sistemas pueden incluir. Este articulo proporciona un desglose de los factores clave a considerar al elegir un analizador de hematología para su clínica veterinaria.
Tecnologías actuales
- Impedancia eléctrica
El método tradicional para contar células es la impedancia eléctrica, también conocida como Principio de Coulter. Se utiliza en casi todos los analizadores de hematología. La sangre completa pasa entre dos electrodos a través de una abertura tan estrecha que solo puede pasar una célula a la vez. La impedancia cambia a medida que pasa una celda. El cambio en la impedancia es proporcional al volumen de la celda, lo que da como resultado un conteo de celdas y una medida del volumen. El análisis de impedancia emite diferenciales de WBC de tres partes (granulocitos, linfocitos y monocitos), pero no puede distinguir entre los leucocitos granulares de tamaño similar: eosinófilos, basófilos y neutrófilos. Se pueden lograr velocidades de conteo de hasta 10 000 células por segundo y se puede realizar un análisis de impedancia típico entre 1 a 5 minutos.
- Citometría de flujo
La citometría de flujo láser es más costosa que el análisis de impedancia, debido a la necesidad de reactivos especiales, pero brinda información detallada sobre la morfología de las células sanguíneas. Es un método excelente para determinar diferenciales de WBC de 5-partes. Una corriente de una sola celda pasa a través de un rayo láser luego de colocar todas las células en fila, una por una. Se mide la absorbancia y la luz dispersada en múltiples ángulos para determinar la granularidad, el diámetro y la complejidad interna de la célula. Estas son las mismas características de morfología celular que se pueden determinar manualmente a partir de un portaobjetos.
- Citometría de flujo fluorescente
La adición de reactivos fluorescentes amplía el uso de la citometría de flujo para medir poblaciones de células específicas. Los tintes fluorescentes revelan la relación núcleo-plasma de cada célula teñida. Es útil para el análisis de plaquetas, glóbulos rojos nucleados y hasta reticulocitos.
Analizadores diferenciales de 3 partes frente a 5 partes
El hemograma es una de las pruebas de rutina más frecuentes realizadas en la clínica, y un analizador de hematología automatizado típico permitirá el cálculo de glóbulos rojos (RBC), glóbulos blancos (WBC), plaquetas (PLT) y hematocrito (HCT) a través de métodos de impedancia eléctrica, así como la concentración de hemoglobina (HGB) mediante fotometría o espectrofotometría.
Por lo general, también se proporcionan resultados diferenciales de leucocitos, pero algunos analizadores solo permiten un diferencial de tres partes según el tamaño (granulocitos, leucocitos de tamaño mediano y linfocitos), mientras que otros proporcionan un diferencial de cinco partes (neutrófilos, basófilos, monocitos, eosinófilos y linfocitos). La medición diferencial de cinco partes más precisa se habilita a través de la citometría de flujo, mientras que los analizadores que usan solo mediciones de impedancia sin citometría de flujo solo pueden diferenciar entre las tres categorías de tamaño mencionadas.
Los analizadores diferenciales de 5 partes proporcionan mediciones cuantitativas y cualitativas para diferenciar y proporcionar recuentos absolutos de basófilos, neutrófilos y eosinófilos. La medición de niveles aumentados o disminuidos de glóbulos blancos puede ayudar a distinguir muestras anormales de pacientes que pueden requerir más pruebas para determinar si hay otras afecciones o enfermedades presentes. Los analizadores diferenciales de 5 partes brindan información clínica importante que no se puede obtener con un analizador diferencial de 3 partes y se pueden usar para identificar varias afecciones clínicamente significativas, como enfermedades autoinmunes e infecciones.
La necesidad de un diferencial de glóbulos blancos
La condición que se encuentra con mayor frecuencia en el examen diario es la inflamación. Cuando un paciente tiene una inflamación bacteriana, los glóbulos blancos aumentan, como resultado de un aumento de los neutrófilos. Si un paciente tiene una inflamación viral, la cantidad de glóbulos blancos permanece sin cambios o disminuye. La inflamación bacteriana no es el único factor que aumenta el número de glóbulos blancos: la leucemia y las reacciones alérgicas contribuyen al aumento de leucocitos.
Lo que se requiere clínicamente para identificar una enfermedad en las situaciones un tanto confusas indicadas anteriormente es el diferencial de glóbulos blancos. El diferencial de glóbulos blancos morfológico se ha utilizado desde que se desarrolló la tinción de Giemsa, y los médicos confían en gran medida en el diferencial de glóbulos blancos microscópicos.
En contraste con su confianza en los resultados, los exámenes que incluyen el diferencial de glóbulos blancos rara vez son realizados por los propios médicos debido a las siguientes razones:
- Se requiere el uso de un microscopio.
- Los resultados del examen dependen de la experiencia en diferencial celular.
- Lleva bastante tiempo y trabajo analizar las características del leucocito.
- Puede haber una amplia gama de desviaciones de medición debido a que la cantidad de glóbulos blancos sujetos a análisis es limitada.
En analizadores diferenciales de 3 partes los neutrófilos y los linfocitos se identifican como poblaciones distintas con monocitos, eosinófilos y basófilos contados juntos como células mixtas, sin poder diferenciarlas.
Estudios que comparan la precisión de los recuentos diferenciales de analizadores de 3-partes con el método de referencia más antiguo de conteo manual de 800 células ha revelado que, aunque la precisión es excelente, la exactitud es menos que buena, especialmente en muestras anormales donde los recuentos celulares relativos y la apariencia morfológica de las células pueden verse alterados. Si bien el análisis automatizado ha sido un avance significativo, generalmente se acepta que los analizadores de un diferencial de 3 partes para muestras patológicas, no es ideal.
En un estado saludable, las 5 subpoblaciones principales se encuentran dentro de los llamados límites y relaciones normales (% de conteos). En presencia de alguna enfermedad o patología, sin embargo:
- Las proporciones se distorsionan y, por lo tanto, el porcentaje de los recuentos no tienen sentido en ausencia de valores absolutos.
- Las subpoblaciones pueden aumentar, por ejemplo, los eosinófilos pueden aumentar en respuesta a una reacción alérgica
- Las subpoblaciones pueden disminuir, por ejemplo, linfocitos típicamente disminuyen de tamaño progresivamente en infecciones virales.
- Células inmaduras que normalmente solo se encuentran en la médula ósea puede aparecer en la sangre periférica, como los granulocitos inmaduros en pacientes con infección severa.
- Pueden aparecer células inmaduras que son anormales, por ejemplo, blastos en pacientes con leucemia aguda.
Mejora de la exactitud de los resultados
El aspecto más importante de los analizadores de hematología automatizados es la capacidad del analizador para detectar y señalar muestras anormales. Se puede obtener eficiencia en el flujo de trabajo al reducir significativamente las células sospechosas y la cantidad de diferenciales manuales. El número de muestras que requieren un examen manual se puede reducir considerablemente con información más detallada y precisión mejorada proporcionada por un diferencial de 5 partes.
Alrededor del 30% de las muestras generan una alerta sospechosa con un analizador de 3 partes que requiere un diferencial manual o frotis. La información más detallada proporcionada por un analizador diferencial de 5 partes puede reducir estas alerta sospechosas en aproximadamente en un 10%.
La necesidad de un frotis manual
El frotis manual continuará jugando un papel crítico para confirmar la presencia de poblaciones celulares anormales que el analizador automatizado identificó como sospechoso.
El propósito del frotis no es verificar el recuento diferencial de células, sino para confirmar la presencia de poblaciones celulares anormales y para registrar cualquier característica morfológica notable.
Aunque el conteo manual por frotis nunca será tan preciso como el conteo automatizado debido al hecho de que el número de células contadas en el frotis es mucho más bajo; el análisis automatizado nunca será capaz de identificar con precisión cada posible célula anormal variante.
Sin embargo, lo contrario pasa cuando el analizador no marca un espécimen como sospechoso de cualquier anormalidad, que será extremadamente improbable que el frotis agregue mayor valor adicional. Para obtener un verdadero beneficio de revisión microscópica manual, los individuos deben ser altamente hábiles y tener la experiencia necesaria.
En este contexto, el analizador diferencial de 5 partes, al reducir drásticamente la necesidad de realizar un recuento diferencial manual y dirigir al veterinario a la búsqueda de la patología específica (en virtud de los resultados), contribuyen a optimizar el tiempo de laboratorio y la eficiencia de costos ya que tales individuos son un recurso escaso.
CONCLUSIONES
Tenemos en el mercado veterinario ambas opciones a utilizar, y dependerá del medico veterinario y del valor agregado que ofrece cada analizador para implementar su clínica veterinaria.
- La reducción en la cantidad requerida de frotices de muestras anormales que necesita un analizador de 5 partes, en comparación con un analizador de 3 partes, se suma al beneficio general que obtendrá el médico veterinario en su práctica diaria.
- En general, las características y la medición de parámetros disponibles en los diferentes analizadores de hematología actuales son cada vez más avanzados, si los comparamos con la mediana a baja capacidad de producción de hemogramas de las clínicas veterinarias. Esto coloca a las características más avanzadas de equipos hematológicos fuera del alcance de las clínicas veterinarias más pequeñas a menos que quieran realizar una inversión para ser referentes y dar un servicio de calidad diferenciado.
Aunque los diferenciales de 3 partes proporcionan precisión para exámenes generales, la precisión para la detección de casos patológicos se mejora enormemente con analizadores de 5 partes diferenciales para muestras anormales, reduciendo el número de frotis de sangre manuales.